博格隆纯化解析丨多特异性亲和-Heparin亲和填料应用案例分享

　　背景介绍

　　什么是肝素？

　　肝素（Heparin）因首先从肝脏发现而得名，天然存在于肥大细胞，现在主要从牛肺或猪小肠提取。肝素是一种黏多糖硫酸脂，由葡萄糖胺，L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成。临床应用及研究显示，肝素除具有抗凝作用外，还具有多种生物活性和临床用途。肝素与多种生物分子都具有亲和作用，基于这一特性，博格隆将其共价偶联到高交联度琼脂糖上，制成一种族特异性亲和层析介质--Heparin Bestarose FF。该介质具有物理及化学稳定、配基不易脱落、使用寿命长、应用范围广泛、容易放大等特点。

　　肝素亲和填料的主要特性

　　● 高载量：≥2.0mg bovine AT III/mL填装介质。

　　● 高选择性：特异性亲和配基，高效纯化目标蛋白。

　　● 高稳定性：耐受常用溶剂，如8M尿素、6M盐酸胍、0.1M NaOH、4M NaCl等进行清洁。

　　肝素亲和填料的应用领域

　　药品

　　与一般亲和介质的不同之处在于，肝素与近百种蛋白都具有亲和作用，因此Heparin Bestarose FF可广泛应用于各种生物分子特别是各种酶类的分离纯化，包括抗凝血酶III、类凝血酶、人凝血因子IX、XI、VIII、脂蛋白脂肪酶、胶原酶、DNA聚合酶等；也能和人白介素、人前列腺生长因子、重组人血管内皮生长因子、软骨生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、重组人酸性成纤维细胞生长因子、重组肝细胞生长因子、重组鼠肝素辅因子II、重组人血小板第四因子、重组人内皮抑素、重组人角质细胞生长因子等生物大分子结合。

　　食品

　　肝素亲和填料除了以上在制药领域中应用以外，在食品领域也有应用。国家标准GB5009.299—2024《食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》于2024-02-08发布，并于2024-08-08实施。根据该国标，测定食品中乳铁蛋白的含量，需使用磷酸盐缓冲液提取试样，并且使用肝素亲和柱富集净化后，再进行测定。

　　Heparin Bestarose FF应用案例

　　Heparin Bestarose FF能从血浆蛋白中特异性地结合并分离抗凝血酶 Ⅲ，这种蛋白具有极强的抗凝血作用，可用于治疗血栓性疾病。

　　Heparin Bestarose FF从血浆中纯化抗凝血酶III

　　• 层析柱及介质：EzFast 1mL，Heparin Bestarose FF

　　• 样品：某动物血浆

　　• 结合缓冲液：0.1M Tris，0.15M NaCl，pH7.4

　　• 清洗缓冲液：0.1M Tris，0.33M NaCl，pH7.4

　　• 洗脱缓冲液：0.1M Tris，2.0M NaCl，pH7.4

Fig. 1纯化后样品SDS-PAGE图

　　使用Tips

　　缓冲液

　　结合缓冲液：20~50mM PB或Tris，pH7.4~8.0，可以加入0.15M NaCl抑制非特异吸附。

　　洗脱缓冲液：20~50mM PB或Tris，1~2M NaCl，pH7.4~8.0，NaCl浓度需要根据目标蛋白的结合力进行适当调整。

　　流速

　　根据柱子的高度一般选用60~300cm/h的流速，柱高越大流速越慢。

　　清洗

　　定期的清洗能有效防止污染物的累积，保持层析介质稳定的工作状态。对于不同类型的杂质和污染物建议清洗条件如下：

　　离子键结合蛋白的去除：先用3~5个柱体积 2M NaCl清洗，后用3~5个柱体积纯水清洗。

　　沉淀或变性蛋白的去除：先用2个柱体积 0.1M NaOH清洗，后用5~10个柱体积纯水清洗，也可用6M盐酸胍或8M尿素清洗。

　　疏水性结合的蛋白的去除：0.1~0.5%的非离子去污剂清洗，后用3~5个柱体积纯水清洗。

　　相关产品信息

　　关于博格隆

　　博格隆成立于2008年，是一家专注于为分离纯化提供高质量层析介质的高新技术企业，是中国较早具备大规模生产分离纯化介质能力的企业之一。博格隆所提供的产品涵盖各类分离纯化介质、预装柱、实验室及工业生产级空柱、微载体，同时提供分离纯化工艺开发服务及填料定制。